口内入路下颌角肥大弧形截骨术
作者：归来 侯全志 张智勇 滕利
单位：100041 北京，中国医学科学院中国协和医科大学整形外科医院颅颌面外科
关键词：下颌角肥大；弧形截骨术；口内入路
癌症990104
【摘要】目的：对广东地区37例肝癌染色体9p的9个位点进行微卫星多态性分析，明确这些位点染色体等位基因杂合性丢失(LOH)的情况，定位该区域可能存在的与肝癌有关的肿瘤抑制基因。方法：对所取位点用PCR法进行微卫星多态性分析并确定发生LOH的位点；结果：30例(80.80%)在至少一个位点发生LOH，其中LOH频率最高的位点是D9S54(6060%)，LOH频率高于50%的位点有位于9p21带的IFNA，D9S1747和D9S1752，6例在所有能够提供信息的位点均发生LOH，7例在所有9个位点均未发生LOH。提示本地区肝癌染色体9P缺失的区域主要位于D9S54(9p24)，和D9S1752，D9S1747，IFNA(9p21)。结论：本研究首次发现肝癌在染色体9P24区发生高频率LOH，染色体9p21区也发生高频率LOH，提示在染色体9p24和9p21区域可能存在多个与肝癌相关的肿瘤抑制基因。
, http://www.100md.com
中图号：R735.7
Study of Loss of Heterozygosity on Chromosome 9 in
Primary Hepatocellular Cell Carcinomas
Shao Jianyong1 Liew Choong Tsek2 Liang Xiaoman1 et al.
1.Dept of Pathology, Cancer Center, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060
2.Dept. of Anatomical and Cellular Pathology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hongkong
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: We analyzed the microsatellite instability of 9 loci on chromosome 9p in 37 hepatocellular carcinomas (HCC) from Guangdong area to detect the loss of heterozygosity (LOH) on these loci, in order to find the possible tumor suppressor gene which associated with HCC. Method: LOH on the 9 loci were ensured by PCR based microsatellite instability analysis. Result: In 37 cases of HCC, at least 30 cases have LOH occurred of non-informative at one locus, 6 of the 30 cases HCC occurred LOH at all the nine loci on chromosome 9p. High frequent LOH (>50% ) occurred at four loci including D9S54 (60.60% ), D9S1752 (53.84% ), IFNA (52.17% ) and D9S1747 (50.00% ). Seven cases have no LOH occurred of non-informative at all the nine loci. The results indicated that high frequent LOH occurred at chromosome 9p24 region and at chromosome 9p21 region. Conclustion: From our investigation, we firstly found that high frequency of LOH occurred at 9p24 band, and higher frequentcy of LOH were also occurred at 9p21 region. These results indicate that more than one TSGs related to HCC may harbored at chromosome 9p24 region and 9p21 region.
, 百拇医药
Key words: Hepatocellular cell carcinoma; Loss of heterozygosity; Polymerase chain reaction; Tumor suppressor gene
原发性肝癌(Primary hepatocellular carcinoma,PHC)在我国的发病率在恶性肿瘤中居第三位，约占世界年发病例数的42.5%[1]。流行病学研究表明，HBV感染、含黄曲霉毒素B1的食物摄入等与PHC发病有关，但这些危险因素是否参与PHC的基因变化尚不清楚。检测肿瘤基因组中特定染色体的微卫星多态性标记，通过等位基因杂合性丢失(Loss of heterozygosity,LOH)分析，可以检测染色体上较小区域基因异常丢失，进而准确定位并发现这些区域可能隐含的肿瘤抑制基因(Tumor suppressor gene,TSG)。肝癌在1p、4p、4q、8p、8q、16p、16q发生LOH[2～4]。在肺小细胞癌、食管癌和鼻咽癌等肿瘤中常见9号染色体9p21-22区发生LOH[5～7]，提示在这个区域可能存在与肝癌相关的TSG。肝癌9号染色体LOH的研究国内尚未见报道。本研究选取染色体9p的9个位点，进行PCR微卫星多态性标记分析广东地区肝癌中的LOH，发现在9p21和9p24两个区域发生明显的等位基因杂合性丢失。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1标本来源
37例PHC组织取自本科存档的蜡块组织，选取肿瘤和瘤旁肝组织蜡块，部分病例蜡块肿瘤和正常肝组织混杂，组织片经修饰剔除正常肝组织。病人年龄40～79岁，平均63岁。其中男34例，女3例。所有病人在住院期间均作了HBV血清五项和HCV血清抗体检测。
1.2DNA抽提
选取瘤细胞保存较好的瘤组织蜡块和癌旁肝组织蜡块，视组织块大小切取5～10片10μm厚的切片放入1.5ml Eppendoff管中，加1ml二甲苯脱蜡10分钟，离心后倾去二甲苯。重复一次。加95%酒精洗二甲苯10分钟，离心后倾去酒精，重复一次。将Eppendoff管置于65℃的温箱中烘干1小时，使酒精完全挥发。用High Pure PCR template Preparation Kit (Boehringer Mannheim)抽提DNA，最终浓度稀释至100ng/μl。
, 百拇医药
1.3微卫星多态性分析
9号染色体9个微卫星标记物引物购自Research Genetic公司或由Oligios Inc公司合成。每对引物正链在T4多取核苷酸合成酶(PNK)催化下标记r-32-P-ATP(Armersham Corporation UK)。PCR反应总体积5μl，含模板DNA150ng，10XPCR缓冲液1.5μl，1.5 mmol/L MgCl,62.5 μmol/L dNTPs,0.1 UTaqDNA酶和0.5Pmol/L正负引物。根据不同引物选择最佳退火温度和时间，PCR反应循环40次，最后于72℃变性7分钟，4℃保存，PCR产物与电泳载样液等量稀释，95℃水浴变性10分钟，取1.5μl点样于6%～7.5%聚丙酰胺凝胶，170V，30～40W电泳3～4小时后真空干胶，于暗盒中对X光底片放射自显影。
2 结果
2.1肝癌组织发生LOH的结果判断
, 百拇医药
癌旁肝组织DNA为多态杂合子时，出现两个等位基因片段，与癌组织对比，癌组织DNA扩增带一条消失活一条带信号明显减弱时定为LOH(如附图)
附图 肝癌9号染色体微卫星多态性分析LOH同位素放射自显影结果。方框下为病例序号，方框上方为微卫星位点名称；方框顶部示肝癌肿瘤组织(T)和癌旁正常肝组织(N)。箭头(←)示肿瘤组织发生LOH，其中一条等位基因电泳带信号癌旁肝组织明显减弱。
2.2本组肝癌组织中染色体9p发生LOH的频率结果
微卫星多态性标记选取的9个位点均在9号染色体短臂上(9p)，其中位于9P21带的7个位点依次为D9S126，D9S1752，D9S1748，D9S1747，D9S1749，D9S1751和IFNA，另外两个位点是D9S162(9p22)，D9S54(9p24)。37例肝癌中，7例在所有9个位点均未发生LOH，30例在至少一个位点发生LOH，其中6例在所有能够提供信息的位点均发生LOH。在所检测的9个位点中，有4个位点发生高频率的LOH大于50%)，分别是D9S54(60.60%)，D9S1752(53.84%)，IFNA(52.17%)，D9S1747(50.00%)。D9S162位点LOH频率最低(15.38%)，另外4个位点的LOH发生频率均大于30%。本组37例肝癌组织中染色体9p发生LOH的频率见表1，提示本地区肝癌染色体9p缺失的区域主要位于D9S54(9p24)，和D9S1752，D9S1747，IFNA(9p21)。
, 百拇医药
表1 37例肝癌组织染色体9P发生LOH频率 基因位点
可提供信
息例数
发生LOH
例数
未发生
LOH例数
LOH频率
(%)
D9S54(9p24)
33
20
, 百拇医药 13
60.60
D9S162(9p22)
13
2
11
15.38
INFA(9p21)
23
12
11
52.17
D9S1751(9p21)
, http://www.100md.com
23
8
15
34.78
D9S1749(9p21)
27
11
16
40.74
D9S1747(9p21)
20
10
10
, http://www.100md.com
50.00
D9S1748(9p21)
27
9
18
33.33
D9S1752(9p21)
36
14
12
53.84
D9S126(9p21)
31
, http://www.100md.com
10
21
32.16
2.3本组患者HBV血清五项和HCV血清抗体检测结果
37例肝癌中，血清HBV五项中至少一项阳性者35例(94.59%)，血清抗HCV抗体阳性者17例(45.95%)，其中HBV和HCV复合感染者16例(43.24%)。HBV和/或HCV与本组肝癌各位点LOH的关系见表2。
表2 HBV和/或HCV与肝癌染色体9PLOH的关系 基因位点
LOH频率
(HBV+HCV阳性)%
LOH频率
, 百拇医药
(HCV阳性)%
D9S54
56.25
61.11
D9S162
60.00
0
IFNA
53.85
33.33
D9S1751
33.33
33.33
, 百拇医药
D9S1749
46.15
35.71
D9S1747
57.14
42.86
D9S1748
35.71
30.77
D9S1752
72.73
40.00
, 百拇医药 D9S126
42.86
23.53
3 讨论
染色体9p区域的缺失是许多肿瘤的细胞遗传学改变，尤其是9p21带，在许多肿瘤中发生高频率LOH。小细胞肺癌、鼻咽癌、食管鳞癌和膀胱癌等肿瘤均发生高频率9p21带LOH[5～7]，并提示在染色体9P上存在至少两个肿瘤抑制基因(TSG)。Tarmin[6]等报告食管鳞癌在染色体9p21带的D9S171和D9S165两个位点发生高频率LOH，Kim[5]等报告小细胞肺癌在9p21带的IFNA和D9S171位点附近发生高频率LOH，Huang[7]等报告鼻咽癌在9p21带的D9S126，D9S171和IFNA等位点发生高频率LOH和等位基因纯合性丢失。
, 百拇医药
本研究对广东地区37例肝癌染色体9p的9个位点进行微卫星多态性分析，结果81.08%的病例在至少一个位点发生高频率LOH，其中LOH频率最高的位点是D9S54(60.60%)，LOH频率高于50%的位点有位于9p21带的IFNA，D9S1747和D9S1752。本组肝癌在染色体9p21区发生高频率LOH的区域与鼻咽癌、小细胞肺癌、食管鳞癌基本一致。但与其它研究结果不同的是，我们发现本地区肝癌中发生LOH频率最高的位点是9p24区的D9S54位点，提示在该位点附近可能存在与HCC有关部门的TSG。本结果支持了在染色体9p可能存在多个肿瘤抑制基因的推断[5]，它们可能存在的位置以在9p24和9p21带的可能性最大。
在染色体9p21带发现并定位的侯选肿瘤抑制基因有p16和p15基因。P16TSG抑制编码CDK4酶(Cyclin-dependent kinase4)的基因活性，而CDK4酶能够促使细胞分裂，有人认为在癌组织中p16基因突变可能比p53基因突变更常见[8，9]。但日本学者报告在日本肝癌中，p16基因丢失/突变频率并不高，仅4.8%的肝癌病例发生p16基因突变，约8%的在IFNA位点发生LOH[10]。本组肝癌染色体9p21区发生高频率LOH的位点是IFNA，D9S1747和D9S1752。其中D9S1747位点位于p16基因下游约150Kb，IFNA和D9S1747均紧邻p16基因，提示p16基因丢失可能和本地区肝癌发生密切相关。D9S1752位点距离9p21区的另外一个肿瘤抑制基因p15基因也较近，那么D9S1752位点区的高频率LOH提示其附近的p15基因也可能发生高频率LOH，从而导致肝癌的发生。本研究结果提示在染色体9p21区的D9S1747和IFNA位点区间和9p24区可能存在多个与肝癌发生相关的TSG。
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肝癌染色体9p的LOH与肿瘤的大小、细胞的分化和肿瘤的临床分期无明显关系。分析9个座位上LOH与HBV和HCV感染的关系，见所有发生LOH的HCC均有HBV感染，18例合并HCV感染的HCC有16例在至少1个座位发生LOH。HBV和HCV复合感染的肝癌LOH发生频率高于HBV单独感染肝癌的LOH发生频率，仅在D9S54座位相反，其中以D9S1752，IFNA，D9S1747三个座位较为明显，而这三个座位正是发生高频率LOH的座位。这一结果进一步支持了HBV参与肝癌发生的基因改变过程，HCV在这一过程中可能对HBV的致癌过程起协同促进作用。
本研究首次发现染色体9p24区和9p21区可能存在的与肝癌有关的TSG，为肝癌的TSG的精确定位工作提供了重要的依据和线索，在此工作基础上，选取D9S54、D9S1752、D9S1747和IFNA等座位附近的位点进行LOH分析，并通过SSCP和DNA测序将能发现并定位在染色体9p上隐含的可能与肝癌有关的肿瘤抑制基因。
, 百拇医药 参考文献
[1]王宝恩.原发性肝癌研究的几个问题.中华医学杂志，1994，74(8)：459
[2]Yeh SH, Chen PJ, Chen HL, et al. Frequent genetic alterations at the distal region of chromosome 1p in human hepatocellular carcinomas. Cancer Research, 1994, 54:4188
[3]Buetow KH, Murry JC, Israel JL, et al. Loss of heterozygosity suggest tumor suppressor gene responsible for primary hepatocellular carcinoma. Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86:8852
, 百拇医药
[4]Zhang W, Hirohashi S, Tsuda H, et al. Frequent genetic alterations on chromosome 16 and 4 in human hepatocellular carcinoma. Jpn J Cancer Research, 1990, 81:108
[5]Kim SK, Ro JY, Kemp BL, et al. Identification of three distinct tumor suppressor loci on the short arm of chromosome 9 in small cell lung cancer. Cancer Res, 1997, 57:400
[6]Tarmin L, Yin J, Zhou XL, et al. Frequent loss of heterozygosity on chromosome 9 in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the esophagus. Cancer Res, 1994, 54:6094
, 百拇医药
[7]Huang DP, Lo GW, Hasselt CA, et al. A region of homozygous deletion on chromosome 9p21-22 in primary nasopharyngeal carcinoma. Cancer Res, 1994, 54:4003
[8]Norbori T, Miura K, Wu DJ, et al. Deletions of the cyclin-dependent kinase-4 inhibitor gene in multiple human cancers. Nature (lond), 1994, 368:753
[9]Cairns P, Polascik TJ, Eby Y, et al. Frequent of homozygous deletion at P16/CDKN2 in primary human tumors. Nature Genetics, 1995, 11:210
[10]Kita R, Nishida N, Fakuda Y, et al. Infrequent alteration of the P16/INK4A gene in liver cancer. In J Cancer, 1996, 67:176
(收稿：1998-05-11 修回：1998-07-13), 百拇医药
单位：100041 北京，中国医学科学院中国协和医科大学整形外科医院颅颌面外科
关键词：下颌角肥大；弧形截骨术；口内入路
癌症990104
【摘要】目的：对广东地区37例肝癌染色体9p的9个位点进行微卫星多态性分析，明确这些位点染色体等位基因杂合性丢失(LOH)的情况，定位该区域可能存在的与肝癌有关的肿瘤抑制基因。方法：对所取位点用PCR法进行微卫星多态性分析并确定发生LOH的位点；结果：30例(80.80%)在至少一个位点发生LOH，其中LOH频率最高的位点是D9S54(6060%)，LOH频率高于50%的位点有位于9p21带的IFNA，D9S1747和D9S1752，6例在所有能够提供信息的位点均发生LOH，7例在所有9个位点均未发生LOH。提示本地区肝癌染色体9P缺失的区域主要位于D9S54(9p24)，和D9S1752，D9S1747，IFNA(9p21)。结论：本研究首次发现肝癌在染色体9P24区发生高频率LOH，染色体9p21区也发生高频率LOH，提示在染色体9p24和9p21区域可能存在多个与肝癌相关的肿瘤抑制基因。
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中图号：R735.7
Study of Loss of Heterozygosity on Chromosome 9 in
Primary Hepatocellular Cell Carcinomas
Shao Jianyong1 Liew Choong Tsek2 Liang Xiaoman1 et al.
1.Dept of Pathology, Cancer Center, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060
2.Dept. of Anatomical and Cellular Pathology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hongkong
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: We analyzed the microsatellite instability of 9 loci on chromosome 9p in 37 hepatocellular carcinomas (HCC) from Guangdong area to detect the loss of heterozygosity (LOH) on these loci, in order to find the possible tumor suppressor gene which associated with HCC. Method: LOH on the 9 loci were ensured by PCR based microsatellite instability analysis. Result: In 37 cases of HCC, at least 30 cases have LOH occurred of non-informative at one locus, 6 of the 30 cases HCC occurred LOH at all the nine loci on chromosome 9p. High frequent LOH (>50% ) occurred at four loci including D9S54 (60.60% ), D9S1752 (53.84% ), IFNA (52.17% ) and D9S1747 (50.00% ). Seven cases have no LOH occurred of non-informative at all the nine loci. The results indicated that high frequent LOH occurred at chromosome 9p24 region and at chromosome 9p21 region. Conclustion: From our investigation, we firstly found that high frequency of LOH occurred at 9p24 band, and higher frequentcy of LOH were also occurred at 9p21 region. These results indicate that more than one TSGs related to HCC may harbored at chromosome 9p24 region and 9p21 region.
, 百拇医药
Key words: Hepatocellular cell carcinoma; Loss of heterozygosity; Polymerase chain reaction; Tumor suppressor gene
原发性肝癌(Primary hepatocellular carcinoma,PHC)在我国的发病率在恶性肿瘤中居第三位，约占世界年发病例数的42.5%[1]。流行病学研究表明，HBV感染、含黄曲霉毒素B1的食物摄入等与PHC发病有关，但这些危险因素是否参与PHC的基因变化尚不清楚。检测肿瘤基因组中特定染色体的微卫星多态性标记，通过等位基因杂合性丢失(Loss of heterozygosity,LOH)分析，可以检测染色体上较小区域基因异常丢失，进而准确定位并发现这些区域可能隐含的肿瘤抑制基因(Tumor suppressor gene,TSG)。肝癌在1p、4p、4q、8p、8q、16p、16q发生LOH[2～4]。在肺小细胞癌、食管癌和鼻咽癌等肿瘤中常见9号染色体9p21-22区发生LOH[5～7]，提示在这个区域可能存在与肝癌相关的TSG。肝癌9号染色体LOH的研究国内尚未见报道。本研究选取染色体9p的9个位点，进行PCR微卫星多态性标记分析广东地区肝癌中的LOH，发现在9p21和9p24两个区域发生明显的等位基因杂合性丢失。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1标本来源
37例PHC组织取自本科存档的蜡块组织，选取肿瘤和瘤旁肝组织蜡块，部分病例蜡块肿瘤和正常肝组织混杂，组织片经修饰剔除正常肝组织。病人年龄40～79岁，平均63岁。其中男34例，女3例。所有病人在住院期间均作了HBV血清五项和HCV血清抗体检测。
1.2DNA抽提
选取瘤细胞保存较好的瘤组织蜡块和癌旁肝组织蜡块，视组织块大小切取5～10片10μm厚的切片放入1.5ml Eppendoff管中，加1ml二甲苯脱蜡10分钟，离心后倾去二甲苯。重复一次。加95%酒精洗二甲苯10分钟，离心后倾去酒精，重复一次。将Eppendoff管置于65℃的温箱中烘干1小时，使酒精完全挥发。用High Pure PCR template Preparation Kit (Boehringer Mannheim)抽提DNA，最终浓度稀释至100ng/μl。
, 百拇医药
1.3微卫星多态性分析
9号染色体9个微卫星标记物引物购自Research Genetic公司或由Oligios Inc公司合成。每对引物正链在T4多取核苷酸合成酶(PNK)催化下标记r-32-P-ATP(Armersham Corporation UK)。PCR反应总体积5μl，含模板DNA150ng，10XPCR缓冲液1.5μl，1.5 mmol/L MgCl,62.5 μmol/L dNTPs,0.1 UTaqDNA酶和0.5Pmol/L正负引物。根据不同引物选择最佳退火温度和时间，PCR反应循环40次，最后于72℃变性7分钟，4℃保存，PCR产物与电泳载样液等量稀释，95℃水浴变性10分钟，取1.5μl点样于6%～7.5%聚丙酰胺凝胶，170V，30～40W电泳3～4小时后真空干胶，于暗盒中对X光底片放射自显影。
2 结果
2.1肝癌组织发生LOH的结果判断
, 百拇医药
癌旁肝组织DNA为多态杂合子时，出现两个等位基因片段，与癌组织对比，癌组织DNA扩增带一条消失活一条带信号明显减弱时定为LOH(如附图)
附图 肝癌9号染色体微卫星多态性分析LOH同位素放射自显影结果。方框下为病例序号，方框上方为微卫星位点名称；方框顶部示肝癌肿瘤组织(T)和癌旁正常肝组织(N)。箭头(←)示肿瘤组织发生LOH，其中一条等位基因电泳带信号癌旁肝组织明显减弱。
2.2本组肝癌组织中染色体9p发生LOH的频率结果
微卫星多态性标记选取的9个位点均在9号染色体短臂上(9p)，其中位于9P21带的7个位点依次为D9S126，D9S1752，D9S1748，D9S1747，D9S1749，D9S1751和IFNA，另外两个位点是D9S162(9p22)，D9S54(9p24)。37例肝癌中，7例在所有9个位点均未发生LOH，30例在至少一个位点发生LOH，其中6例在所有能够提供信息的位点均发生LOH。在所检测的9个位点中，有4个位点发生高频率的LOH大于50%)，分别是D9S54(60.60%)，D9S1752(53.84%)，IFNA(52.17%)，D9S1747(50.00%)。D9S162位点LOH频率最低(15.38%)，另外4个位点的LOH发生频率均大于30%。本组37例肝癌组织中染色体9p发生LOH的频率见表1，提示本地区肝癌染色体9p缺失的区域主要位于D9S54(9p24)，和D9S1752，D9S1747，IFNA(9p21)。
, 百拇医药
表1 37例肝癌组织染色体9P发生LOH频率 基因位点
可提供信
息例数
发生LOH
例数
未发生
LOH例数
LOH频率
(%)
D9S54(9p24)
33
20
, 百拇医药 13
60.60
D9S162(9p22)
13
2
11
15.38
INFA(9p21)
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11
52.17
D9S1751(9p21)
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D9S1749(9p21)
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11
16
40.74
D9S1747(9p21)
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D9S1748(9p21)
27
9
18
33.33
D9S1752(9p21)
36
14
12
53.84
D9S126(9p21)
31
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10
21
32.16
2.3本组患者HBV血清五项和HCV血清抗体检测结果
37例肝癌中，血清HBV五项中至少一项阳性者35例(94.59%)，血清抗HCV抗体阳性者17例(45.95%)，其中HBV和HCV复合感染者16例(43.24%)。HBV和/或HCV与本组肝癌各位点LOH的关系见表2。
表2 HBV和/或HCV与肝癌染色体9PLOH的关系 基因位点
LOH频率
(HBV+HCV阳性)%
LOH频率
, 百拇医药
(HCV阳性)%
D9S54
56.25
61.11
D9S162
60.00
0
IFNA
53.85
33.33
D9S1751
33.33
33.33
, 百拇医药
D9S1749
46.15
35.71
D9S1747
57.14
42.86
D9S1748
35.71
30.77
D9S1752
72.73
40.00
, 百拇医药 D9S126
42.86
23.53
3 讨论
染色体9p区域的缺失是许多肿瘤的细胞遗传学改变，尤其是9p21带，在许多肿瘤中发生高频率LOH。小细胞肺癌、鼻咽癌、食管鳞癌和膀胱癌等肿瘤均发生高频率9p21带LOH[5～7]，并提示在染色体9P上存在至少两个肿瘤抑制基因(TSG)。Tarmin[6]等报告食管鳞癌在染色体9p21带的D9S171和D9S165两个位点发生高频率LOH，Kim[5]等报告小细胞肺癌在9p21带的IFNA和D9S171位点附近发生高频率LOH，Huang[7]等报告鼻咽癌在9p21带的D9S126，D9S171和IFNA等位点发生高频率LOH和等位基因纯合性丢失。
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本研究对广东地区37例肝癌染色体9p的9个位点进行微卫星多态性分析，结果81.08%的病例在至少一个位点发生高频率LOH，其中LOH频率最高的位点是D9S54(60.60%)，LOH频率高于50%的位点有位于9p21带的IFNA，D9S1747和D9S1752。本组肝癌在染色体9p21区发生高频率LOH的区域与鼻咽癌、小细胞肺癌、食管鳞癌基本一致。但与其它研究结果不同的是，我们发现本地区肝癌中发生LOH频率最高的位点是9p24区的D9S54位点，提示在该位点附近可能存在与HCC有关部门的TSG。本结果支持了在染色体9p可能存在多个肿瘤抑制基因的推断[5]，它们可能存在的位置以在9p24和9p21带的可能性最大。
在染色体9p21带发现并定位的侯选肿瘤抑制基因有p16和p15基因。P16TSG抑制编码CDK4酶(Cyclin-dependent kinase4)的基因活性，而CDK4酶能够促使细胞分裂，有人认为在癌组织中p16基因突变可能比p53基因突变更常见[8，9]。但日本学者报告在日本肝癌中，p16基因丢失/突变频率并不高，仅4.8%的肝癌病例发生p16基因突变，约8%的在IFNA位点发生LOH[10]。本组肝癌染色体9p21区发生高频率LOH的位点是IFNA，D9S1747和D9S1752。其中D9S1747位点位于p16基因下游约150Kb，IFNA和D9S1747均紧邻p16基因，提示p16基因丢失可能和本地区肝癌发生密切相关。D9S1752位点距离9p21区的另外一个肿瘤抑制基因p15基因也较近，那么D9S1752位点区的高频率LOH提示其附近的p15基因也可能发生高频率LOH，从而导致肝癌的发生。本研究结果提示在染色体9p21区的D9S1747和IFNA位点区间和9p24区可能存在多个与肝癌发生相关的TSG。
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肝癌染色体9p的LOH与肿瘤的大小、细胞的分化和肿瘤的临床分期无明显关系。分析9个座位上LOH与HBV和HCV感染的关系，见所有发生LOH的HCC均有HBV感染，18例合并HCV感染的HCC有16例在至少1个座位发生LOH。HBV和HCV复合感染的肝癌LOH发生频率高于HBV单独感染肝癌的LOH发生频率，仅在D9S54座位相反，其中以D9S1752，IFNA，D9S1747三个座位较为明显，而这三个座位正是发生高频率LOH的座位。这一结果进一步支持了HBV参与肝癌发生的基因改变过程，HCV在这一过程中可能对HBV的致癌过程起协同促进作用。
本研究首次发现染色体9p24区和9p21区可能存在的与肝癌有关的TSG，为肝癌的TSG的精确定位工作提供了重要的依据和线索，在此工作基础上，选取D9S54、D9S1752、D9S1747和IFNA等座位附近的位点进行LOH分析，并通过SSCP和DNA测序将能发现并定位在染色体9p上隐含的可能与肝癌有关的肿瘤抑制基因。
, 百拇医药 参考文献
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(收稿：1998-05-11 修回：1998-07-13), 百拇医药